Fotometria de massa: Complexo Shu humano regula atividade RAD51 pelo RPA em ssDNA

Este estudo investigou o processo de reparo do DNA durante a recombinação homóloga e o estresse de replicação, que depende da proteína RAD51. A atividade da RAD51 é positivamente regulada pela BRCA2 e pelos parálogos da RAD51. O complexo Shu é um complexo contendo parálogos da RAD51, composto por SWSAP1 e SWS1. Demonstramos que SWSAP1-SWS1 se liga à RAD51, mantém a estabilidade do filamento da RAD51 e facilita a troca de filamentos. Utilizando microscopia de fluorescência confocal de única molécula combinada com pinças ópticas, foi mostrado que SWSAP1-SWS1 decora filamentos da RAD51 proficientes para a recombinação homóloga. Também descobriram que SWSAP1-SWS1 aumenta a difusão do RPA em ssDNA (DNA de fita simples). Importante destacar, o estudo demonstrou que células de knockout humano de sgSWSAP1 e sgSWS1 são sensíveis à inibição farmacológica de PARP e APE1. Por fim, identificaram variantes cancerígenas em SWSAP1 que alteram a formação do complexo SWS1. Em conjunto, demonstraram que SWSAP1-SWS1 estimula o reparo de alta fidelidade dependente da RAD51 e pode ser um importante novo alvo terapêutico contra o câncer.

O uso de fotometria de massa foi vantajoso neste estudo, pois permitiu a identificação precisa das interações entre as proteínas envolvidas no processo de reparo do DNA. Especificamente, a técnica possibilitou a observação da ligação entre SWSAP1-SWS1 e RAD51, além de fornecer insights sobre como essa interação afeta a estabilidade dos filamentos da RAD51 e a dinâmica do RPA em ssDNA. Isso contribuiu para uma compreensão mais completa do mecanismo molecular subjacente ao processo de reparo do DNA e identificação de possíveis alvos terapêuticos contra o câncer.

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